1.2 微生物的培养技术和应用——微生物的选择培养和技术-【精准备课】2022-2023学年高二生物同步教学精品课件（人教版2019选择性必修3）

第2节 微生物的培养技术和应用 二、微生物的选择培养和技术 1、实例： DNA多聚酶链式反应(PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。 什么是TaqDNA聚合酶？从哪里获得？如何获得Taq细菌? 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 一、选择培养基 选择培养基： 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 稀释涂布法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里， 聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。 稀释涂布平板法 二、微生物的选择培养 微量 移液器 滴 灼 涂 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放在30-37℃恒温箱中培养1-2d，平板上就可以观察到单菌落。 常用方法： 1、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法、间接计数法） 原理： 成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 稀释涂布平板法、显微镜直接计数法、滤膜法 三、微生物的数量测定 ②为了保证结果的准确，一般选择菌落数在30—300的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。 计算公式 每克样品中的菌落数＝ ×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 ①设置重复组，目的是增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1ml接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。 操作 为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布培养，计算出菌落平均数。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。？ 是因为当2个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数表示而不用活菌数来表示。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 思考题 1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？ 　　答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。 例：某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)多少？ 每克样品中的菌落数=(C÷V)×M =(234/0.1)×106＝2.34×109 2、显微镜直接计数法 （1）原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。 （2）方法：用血细胞计数板计数。 计数板是特制的载玻片，其上有特定的面积为1mm2，高为0.1mm的计数室，一个计数室又被分成25个（或16个）中格，每个中格再被分成16个（或25个）小格，每个计数室都由400个小格组成。 （3）操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4~5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含的细菌数，再按计数公式求出每毫升样品中所含的细菌数。 （4）计算公式 （5）缺点：不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 3、滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 大肠杆菌菌落呈黑色或深紫色,有金属光泽 原理： 伊红—美蓝培养基(EMB)是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为大肠杆菌的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈深紫色或黑色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的