1.2.1 微生物的基本培养技术(第2课时)-【爱上生物课】2022-2023学年高二生物优质精讲课件（人教版2019选择性必修3）

第2节 微生物的培养技术及应用 01 一 生物的基本培养技术（第2课时） 第1章 发酵工程 1 在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下 形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。 由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。 1.相关概念 2.微生物纯培养的步骤 三、微生物的纯培养 培养物： 纯培养物： 纯培养： 获得纯培养物的过程就是纯培养。 配制培养基 灭菌 接种 分离 培养等 酵母菌的纯培养 微生物群 分散或稀释 单个细胞 繁殖 单菌落 (1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落 (2)单菌落：一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 (3)获得单菌落的方法：稀释涂布平板法、平板划线法 1. 实 验 原 理 特征： 大小、形状、隆起程度、颜色等 功能： 鉴定菌种的重要依据 单个微生物 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 菌落 在相同培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征 酵母菌的纯培养 酵母菌的纯培养 2.目的要求 (1)学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。 (2)学会进行无菌操作。 (3)尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。 3.材料用具 酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖(或蔗糖)、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸(或报纸)、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。 4.方法步骤 配制 培养基 称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。 灭菌 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15~30min。将5～8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160～170℃灭菌2h。 倒平板 待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 酵母菌的纯培养 （1）制备培养基 ④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置 ①拔出锥形瓶的棉塞 ②将瓶口迅速通过火焰 倒平板的具体操作步骤 ③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。 倒平板注意事项： ①温度：50℃左右 ②操作：在酒精灯火焰附近 ③冷凝后平板倒置 酵母菌的纯培养 琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时，高于50 ℃则会烫手，若低于50℃不及时操作，琼脂会凝固。 3.为什么倒平板时，将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不能完全打开？ 防止杂菌污染培养基 实验注意事项、分析、思考 1.培养基灭菌后为什么要冷却到50℃左右时开始倒平板？ 2.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 酵母菌的纯培养 6.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 4.为什么倒平板和接种整个过程要在酒精灯火焰旁进行？ 避免杂菌污染 5.倒平板时为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 实验注意事项、分析、思考 酵母菌的纯培养 将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。 8.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？ 7.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 实验注意事项、分析、思考 酵母菌的纯培养 （2）接种和分离酵母菌 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。 连续划线法 分区划线法 酵母菌的纯培养 4.方法步骤 平板划线的具体操作步骤 ①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。 ②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞。 ③将试管口通过火焰 ④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液。 ⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。 ⑥左手在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意