内容正文:
含义
从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术
营养条件一①成分齐全,比例合适—②需要加入血清等一些天然成分一③一般用液体培养基
动物
无菌、无
对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下操作
细胞
毒的环境
培养液还需要定期更换,以便清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害
培养
温度、pH
0适宜的温度:哺乳动物多以(36.5士0.5)℃为宜。一2适宜的pH:多数细胞生存的适宜pH妫7.2~7.4。
的条
和渗透压
③渗透压也是动物细胞培养过程中需要考虑的一个重要环境参数
件
气体
动物细胞培养所需气体主要有02和C02.02是细胞代谢所必需的。C02的主要作用是维持培养液的pH
环境
通常采用培养皿或松盖培养瓶,并将它们置于含有95%空气和5C02的混合气体的C02培养箱中进行培养
动物
细胞
在一定条件下,干细胞可以分化成其他类型的细胞。干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和
培养
器官中。包括胚胎干细胞和成体干细胞等
图1
存在场所:存在于早期胚胎中
胚胎干细胞(S细胞)
特点:具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步
干细胞
干细胞
形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能
来源
培养及
骨髓中的造血干细胞、神经系统中的神经干细
其应用
成体干细胞
存在场所:存在于成体组织或器官内的干细胞
胞和睾丸中的精原干细胞
特点:成体干细胞具有组织特异性,只能分化成特定的细胞或组织,不具有发育成完整个体的能力
干细胞的应用—医学上—造血干细胞移植
动
iPS细胞的
科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞,获得了类似胚胎干细胞的一种细胞,将它称为诱导多能干细胞(P$细胞)
研究与应用
iPS细胞的获取借助载体将特定基因导入细胞中,直接将特定蛋白导入细胞中或者用小分子化合物等来诱导形成PS细胞
细
概念、—使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术
胞
诱导融合的常用方法①物理法:电融合法等。②化学法:PG融合法等。③生物法:灭活病毒诱导法等
意义突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能。人们可以按照预先的设计使不同细胞融合
程
特点能准确识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并可大量制备
两次筛选。第一次筛选杂交瘤细胞,第二次筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞
动物
单克隆抗体的制备:图2
细胞
作为诊断试剂,在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用
图3动物细胞核移植
融合
技术
单克隆抗体诊断试剂盒的优点:特异性强、灵敏度高、可以大量制备
卵巢
单克
ADC的结构:ADC通常由抗体、接头和药物
采集
隆抗
(如细胞毒素)三部分组成
卵母细胞
体的
运载药物
ADC的特点(优点):既可以特异性识别肿瘤抗
体外培养
应用
原,又可以杀伤肿瘤细胞,而且具有靶点清楚、
期
效率高、毒副作用小等优点
显微操作去核
单克隆抗体自身也能用于治疗疾病
胞培
去核卵母细胞
细胞融合:电融合法
将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中,使这个重
重构胚
动物
概念
新组合的细胞发育成新胚胎,进而发育成动物个体的技术
物理方法:电刺激
体细
原理
动物细胞核具有全能性
激活重构胚
化学方法:Ca载
乙醇、蛋白酶
胞核
胚胎细胞核移植:胚胎细胞分化程度低,表现全能性容易
·胚胎移植
合成抑制剂等
移植
类型
代孕母体
技术
体细胞核移植:体细胞分化程度高,表现全能性十分困难
生出
图3
卵母细胞内含有促使体细胞核表现全能性的物质和营养调节,而卵母细胞
克隆动物
体积大,易于操作。
新鲜取材的动
成块的组织中,细胞与细胞靠在一起,彼此限
物组织
制了生长和增殖(接触抑制)
培养骨髓瘤细胞
注射特定的抗原
方法:机械方法或用胰蛋白酶、胶原带白酶等处理一段
可以从小鼠的脾中得到产
将组织分散成
时间使细胞分散开的
骨髓瘤细胞
多种淋巴细胞
生特定抗体的B淋巴细胞
单个细胞
原因:①是能保证细胞所需要的营养供应;②是能保证
诱导磊融合
细胞内有害代谢物的及时出
制成细胞悬液
动物组织处理后的初次培养,即分瓶前的培养
多种杂交细胞
动物组织处理后的初次培养,即分瓶前的培养。
筛选
用特定的选择培养基进行筛选
原代培养
培养皿或松盖培养瓶内培养。
杂交瘤细胞既能迅速大量增殖,又能产生抗体
「细胞贴壁:细胞往往很快会贴附在培养瓶的
克隆化培养和抗体检测,经过多次筛选,就可
①悬浮在培养
②贴附于某些基质
瓶壁上生长的现象
筛选
获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞
液中生长
表面生长繁殖
接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互
少数细胞
大多数细胞
接触时,细胞通常会停止分裂增殖的现象
抗体检测呈阳性的除交瘤
进行传代培养的原因:①悬浮培养的细胞会因细胞密
细胞
抗