内容正文:
第2节 基因工程及其应用
第6章 从杂交育种到基因工程
资料
以往,治疗糖尿病的胰岛素是从动物胰腺中提取的,从100千克猪、牛等动物的胰腺只能提取3-4克胰岛素,治疗一个患者需宰杀40-50头牛,这种药物的造价就可想而知了。
微生物可以有分泌产物,且微生物繁殖速率快
设想二
能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物?
经过多年的努力,科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。
什么叫基因工程?
基因工程的基本工具有哪些?
阅读教材 P102,解决以下问题:
能力体现
基因工程的操作步骤?
基因工程概念
基因工程:又叫基因拼接技术或DNA重组技术。就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰和改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向的改变生物的遗传性状。
基因重组
原 理:
操作水平:
DNA分子水平
结 果:
定向地改造生物的遗传性状,
获得人类所需要的品种。
基因工程操作的工具
将目的基因片断从人体细胞内提取,
需要基因的剪刀——限制性内切酶。
将目的基因与运载体DNA连接,
需要基因的针线——DNA连接酶。
将目的基因运入大肠杆菌,
需要基因的运输工具——运载体。
分布:主要在微生物中。
特点:专一性和特异性,即识别特定核苷酸序列,切割特定切点。
结果:产生黏性未端(碱基互补配对)。
举例:大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开。
一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。
1.基因的剪刀—限制性内切酶
限制性内切酶(EcoRⅠ)作用过程
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什么是黏性末端?
被限制酶切开的DNA两条单链的切口
带有几个伸出的核苷酸,
它们之间正好互补配对,
这样的切口叫黏性末端。
模型构建1
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
练习使用EcoRI 剪切目的基因
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
目的基因
黏性末端
被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端?
思考:
是
基因的针线:DNA连接酶
G A A T T C
C T T A A G
G A A T T C
C T T A A G
G
C T T A A
A A T T C
G
G
C T T A A
A A T T C
G
G
C T T A A
A A T T C
G
用同种限制酶切割
2.基因的针线—DNA连接酶
DNA连接酶连接的是两个脱氧核苷酸分子的什么部位?
磷酸二酯键
磷酸二酯键
模型构建2
使用DNA连接酶制作重组DNA分子
甲片段
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
乙片段
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
重组DNA分子
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
DNA连接酶的作用是:
A.子链和母链之间形成氢键
B.黏性末端之间形成氢键
C.两个DNA末端间的缝隙连接(磷酸二酯键)
D.A、B、C都对
C
C T T A A
G
A A T T C
G
重组DNA分子
(外源基因)
?如何将外源基因送入受体细胞呢?
作用:将外源基因送入受体细胞。
种类:质粒、噬菌体和动植物病毒。
能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。
基因工程最常用的运载体是___质粒____
3.基因的运输工具——运载体
大肠杆菌
DNA
质粒
(环状DNA分子)
控制质粒DNA转移的基因
抗生素抗性基因
利用质粒将外源基因运载入受体细胞中
基因操作的基本步骤
提取目的基因
目的基因与运载体结合
将目的基因导入受体细胞
目的基因的检测和表达
归纳:
?如何让大肠杆菌生产人胰岛素?
①从细胞中分离出DNA
①
②
③
④
⑤
⑥
②限制酶截取DNA片断
③分离大肠杆菌中的质粒
④ DNA重组
⑤用重组质粒转化大肠杆菌
⑥培养大肠杆