内容正文:
第34讲 微生物的培养技术及应用
课程标准 考情概述
1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提
2.阐明无菌技术是在操作过程中,保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术
3.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物
4.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法
5.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法
1.对能力的考察主要集中在观察收集信息、实验探究、分析数据、解释预测等方面。
2.命题常以生产生活实例考察如何利用特殊培养基对微生物进行纯化培养。
考点一 微生物的基本培养技术
1.培养基的配制
(1)培养基的概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)种类
(3)成分
①主要成分:水、碳源、氮源、无机盐。
②其他成分:还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。例如:在培养乳酸杆菌时,需要在培养基中添加维生素;在培养霉菌时,需要将培养基调至酸性;在培养细菌时,需要将培养基调至中性或弱碱性;在培养厌氧微生物时,需要提供无氧的条件。
(4)用途:用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
2.无菌技术
(1)目的:获得纯净的微生物培养物。
(2)关键:防止杂菌污染。
(3)常用方法:消毒和灭菌。
(4)无菌技术的主要方法及适用对象(连线)
措施
操作对象
Ⅰ.培养基
主要方法
①灼烧灭菌
a.消毒
Ⅱ.接种环
Ⅲ.操作者双手
②干热灭菌
③巴氏消毒
b.灭菌
Ⅳ.培养皿
Ⅴ.无菌室
Ⅵ.牛奶
④紫外线消毒
⑤化学药物消毒
⑥湿热灭菌
提示:a—Ⅲ—⑤ a—Ⅴ—④ a—Ⅵ—③ b—Ⅰ—⑥ b—Ⅱ—① b—Ⅳ—②
3.微生物的纯培养
(1)概念
①培养物:在微生物学中,将接种于培养基内,在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。
②纯培养物:由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。
③纯培养:获得纯培养物的过程就是纯培养。
(2)微生物纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等。
(3)酵母菌的纯培养
①菌落的概念:分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。
②接种方法:最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
③方法步骤
a.制备培养基
配制培养基→灭菌→倒平板。
b.接种和分离酵母菌
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养,可以分离得到单菌落。
c.培养酵母菌
完成平板划线后,待菌液被培养基吸收,将接种后的平板和一个未接种的平板倒置,放入28 ℃左右(培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异)的恒温培养箱中培养24~48 h。
④倒平板的具体操作步骤
⑤平板划线具体操作
1.配制培养基时,应先调pH再灭菌。( √ )
2.为防止杂菌污染,接种环经灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落。( × )
提示:灼烧接种环,待其冷却后才能取菌液,以免温度过高杀死菌种。
3.倒平板时,若皿盖和皿底之间溅上培养基,则这个培养基不可用。( √ )
4.除第一次划线外,每一次划线的起点都是第一次划线的末端。( × )
提示:要从上一划线区域的末端开始往下一区域划线,且每次划线前应灼烧接种环。
5.用平板划线法接种时,每次划线之间都需蘸取菌液。( × )
提示:除第一次划线外,其他各次划线前不需新蘸取菌液,菌种来源于上一次所划线的末端。
1.(选择性必修3 P10旁栏思考拓展)为什么培养基需要氮源?
提示:培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
2.(选择性必修3 P12“探究·实践”拓展)(1)在未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有,说明了什么?
提示:在未接种的培养基表面应该没有菌落生长,如果有,说明培养基被杂菌污染。
(2)如果在接种酵母菌的培养基上观察到了不同形态的菌落,可能是由哪些原因引起的?
提示:如果观察到了不同形态的菌落,可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
1.培养基的成分及功能
营养要素
来源
功能
碳源
(提供
碳元
素的
物质)
无机
碳源
NaHCO3等含碳无机物
①构成细胞物质和一些代谢产物;
②有机碳源既是碳源又是能源
有机
碳源
糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等
氮源
(提供
氮元
素的
物质)
无机
氮源
铵盐、硝酸盐等
将无机氮合成含氮的代谢产物
有机
氮源
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物
生长因子
(生长必不
可少的微
量有机物)
维生素、氨基酸、碱基
①酶和核酸的组成成分