内容正文:
浙科版2019版总复习选择性必修三
第一节 体液调节是通过化学信号实现的调节
第一节 体液调节是通过化学信号实现的调节
第二节 神经系统通过下丘脑控制内分泌系统
第二节 神经系统通过下丘脑控制内分泌系统
第30课时 发酵工程
第十单元 生物技术工程
考点一 微生物的基本培养技术
1. 培养基
需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求,以及微生物生活所需要的能量来源。
异养型生物:培养基中的有机物(有机碳源,无机碳源不提供能量)
自养型生物:光能或者化学反应释放的能量。
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(1)某些异养型微生物在有有机物存在的情况下可同时将CO2转变为自身的物质,它们只是不以CO2为唯一(或主要的)碳源。
(2)自养型微生物也并非不能利用有机物生长。例如,紫色非硫细菌在没有有机物时可以将CO2转变为有机物,而当有机物存在时,它又可以利用有机物生长;它在有光照和无氧条件下可以利用光能生长,在黑暗和有氧条件下可以利用有机物生长。这种营养方式的可变性提高了微生物在环境中的生存能力。
许多微生物的代谢方式并不唯一
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蛋白胨、酵母提取物:为细菌生长提供碳源、氮源和维生素(生长因子)
氯化钠:维持一定的渗透压
琼脂:凝固剂,不易分解,一般不作为营养物质。其在96 ℃时融化成液体,冷却到45 ℃以下即重新凝固。
( LB培养基)
LB固、液体培养基:蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水、琼脂(固体培养基)
豆芽汁、稻草浸汁、牛奶、血清
选择:菌种分离
鉴别:菌种鉴定
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液体培养基:培养基液体状,没加凝固剂,常用于大规模快速繁殖某种微生物。
固体培养基:培养基固体状,加了凝固剂(一般是琼脂)。包括“平板” 和“斜面”。
“平板”(菌落) 可用于分离、鉴定、活菌计数
“斜面”常用于菌种保存
菌种短期保存:在无菌条件下将单菌落用接种环取出,再用平板划线法接种在固体斜面上,在37 ℃下培养24 h后,置于4 ℃冰箱中保存。
菌种长期保存:甘油冷藏法( -20℃ ) 微生物在甘油中生长和代谢受到抑制达到保藏的目的。
市售6×上样缓冲液(loading buffer);内含甘油可以增加样品密度,确保DNA能够沉入加样孔内;含有少许溴酚蓝作为电泳指示剂,电泳时溴酚蓝迁移速率较快,在其迁移出凝胶前关闭电泳仪电源。
1.将有(为液体状的固体培养基)培养基的三角瓶和培养皿放到超净台上;
2.打开超净台的紫外灯和过滤风(注意打开紫外灯后人必须离开)
倒平板
3.待固体培养基冷却到60℃时(手放上还有
些热的时候),关闭紫外灯,点燃酒精灯,
用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面,并用酒精
棉球擦手。
4.在酒精灯火焰旁,将三角瓶中的培养基倒在培养皿里。将培养基分别倒至4个培养皿中,每倒入一个培养皿后立即将培养皿置于水平位置上,并轻轻晃动,使培养基铺满底部,待凝固后即形成平面。凝固后将培养皿倒置。(利于水分蒸发,防止冷凝水污染培养基)
合成培养基:化学成分完全清楚的培养基,一般用于实验室进行的、要求可重复性强的各项研究工作。
天然培养基:成分还不十分清楚或成分不恒定的天然有机物制成的培养基。成本较低,除了在实验室常用外,更多被用于大规模的生物发酵工业。
如:马铃薯蔗糖培养基、麦芽汁蔗糖培养基等。
选择培养基和鉴别培养基的比较
抑制不需要微生物的生长,促进需要的微生物的生长,从而提高对该菌的筛选效率
不能抑制不需要微生物的生长。
酚红鉴定分解尿素的菌,不能筛选。
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选择培养基的常用设计方案
加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌。
加入青霉素、卡那霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞。
加入高浓度食盐的培养基:分离耐盐的金黄色葡萄球菌。
不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌。
不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物。
加入氨基蝶呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞。
提醒:使用选择培养基对微生物进行筛选时,需设置对照实验,一般选择LB全营养培养基作为对照。
实例:配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基
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培养基的配置过程
调pH值
混合加热融化(琼脂)
确定配方
及用量
灭菌
分装
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2. 灭菌和无菌操作技术
(1)目的:获得纯净的微生物培养物。
(2)关键:防止杂菌污染。
(3)消毒
①定义:采用较温和的物理、化学方法杀死物体表面或
内部一部分不需要的微生物。
②原理:加热使蛋白质变性、紫外线使菌体的蛋白质和
核酸变性。
③列举物理方法:煮沸消毒、紫外线照射等。
④