内容正文:
第1节 重组DNA技术的基本工具
(第2课时)
DNA的粗提取与鉴定
探究·实践
DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异,可以利用这些差异,选用适当的物理或化学方法对它们进行提取
提取DNA分子的基本思路是什么?
2
1. DNA不溶于酒精,但某些蛋白质溶于酒精。利用这一原理,可以初步分离DNA与蛋白质。
DNA粗提取与鉴定的实验原理
2. DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,它能溶于2mol/L NaCl溶液。
3.一定温度下,DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色,
因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂
0
0.14
NaCI浓度(mol/L)
DNA溶解度
目的要求
1.了解DNA的物理和化学性质,理解DNA粗提取和鉴定的原理。
2.学会DNA粗提取的方法以及用二苯胺试剂对DNA进行鉴定。
材料
新鲜洋葱(也可选用香蕉、菠菜、菜花和猪肝等,提取DNA的方法可能稍有不同)、研磨液、体积分数为95%的酒精、 2mol/L 的NaCl溶液、二苯胺试剂和蒸馏水等。
哺乳动物的血液可以作为提取DNA的材料吗?
思考
不可以。因为哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和线粒体等。
选用DNA含量相对较高的生物组织。
烧杯、量筒、玻璃棒、研钵、纱布、漏斗、试管、试管架、试管夹、酒精灯、石棉网、三脚架、火柴、刀片和天平等。
用具
方法步骤
1.研磨洋葱
称取约30g洋葱切碎,放入研钵中,倒入10mL研磨液,充分研磨。
2.过滤或者离心获取含DNA的上清液
在漏斗中垫上纱布,将洋葱研磨液过滤到烧杯中,在4℃冰箱中放置几分钟后,再取上清液。
也可直接将研磨液倒入塑料离心管中,1500r/min的转速下离心5min,再取上清液放入烧杯中。
3.冷酒精析出DNA或离心沉淀析出DNA
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%),静置2~3min,溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去上面的水分;
或将溶液倒入塑料离心管中,在10000r/min的转速下离心5min,弃上清液,将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。
4.DNA的鉴定
取两支20mL的试管,各加入2 mol/L的NaCl溶液5mL。