3.2 基因工程的基本操作程序（第二课时）-【名课堂精选】2021-2022学年高二生物同步优质课件（人教版2019选择性必修3）

基 因 工 程 重组DNA技术的基本工具 基因工程的基本操作程序 基因工程的应用 蛋白质工程的原理和应用 第2节基因工程的基本操作程序 第2课时 赵全华 目的基因的筛选与获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 前提 核心 关键 保证 基因工程的基本操作程序（四步） 3 获取了足够量的Bt基因后，下一步就是要让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时，使Bt基因能够表达和发挥作用 这就是需要构建基因表达载体。 这也是培育转基因抗虫棉的核心工作 那么基因表达载体是由哪些部分组成的呢？ 目的基因 启动子 终止子 标记基因 抗生素抗性基因） 表达特定性状 位于基因的首端,是RNA聚合酶结合位点，基因转录的开始 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 复制原点：DNA聚合酶结合位点 二、基因表达载体的构建（核心） ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键。 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少。 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 6 思考 1.表达载体为什么一定要有启动子？ （1）生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能有利于基因的表达； （2）通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体细胞无法转录。 终止子 终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，筛选含有目的基因的受体细胞。如抗生素抗性基因，荧光蛋白基因等 启 动 子 操纵基 因 结构基因 启动子 RNA聚合酶 一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游（首端），紧挨转录的起始位点是RNA聚合酶的识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。 基因表达载体的构建过程 1.用一定的限制酶切割载体，使其出现一个切口，露出黏性末端. 2.用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。 3.将切下的目的基因片段拼接到载体的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子。 用DNA连