内容正文:
第一节 细胞培养是动物细胞工程的基础
课程目标
知识目标
核心素养
1.概述动物细胞培养的过程
2.举例说明动物细胞培养的应用价值
1.认同动物细胞培养是动物细胞工程的基础
2.认识动物细胞培养是动物细胞工程常用的技术手段,加深对科学、技术、社会相互关系的认识,学会运用生物学原理解释生物学社会议题
知识点一 动物体细胞可在体外适宜条件下进行培养
1.动物细胞培养:从动物体获得相关组织,__分散成单个细胞__后,在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。
2.动物细胞培养的适宜条件
(1)温度:大多数情况下,细胞生长的最适宜温度是__37__℃__, 温差一般不超过±0.5 ℃。
(2)pH:大多数细胞适宜的pH为__7.2~7.4__,偏离此范围对细胞产生有害影响。造成培养基pH波动的主要物质是细胞代谢产生的__CO2__,可通过给培养箱提供恒定的__5%__的CO2浓度,使之与培养基中的__NaHCO3__处于平衡状态,调节pH的相对稳定。
(3)__95%__的空气可以保证细胞呼吸对氧气的需要。
(4)__无菌、无毒__的条件
①培养材料、__培养基__、培养环境、操作过程严格控制无菌。
②在培养基中加入抗生素能抑制__细菌和真菌__的生长,从而预防污染。常用的抗生素有青霉素、链霉素、卡那霉素和庆大霉素等。
③动物细胞培养液中常含有在高温条件下变性失去功能的物质,如__血清__等,因而对培养液的这些成分采用__过滤__除菌。
④为防止细胞代谢产生的有毒物质危害细胞,应定期更换__培养液__。
3.动物细胞的生长和增殖需要充足的营养物质。培养动物细胞的培养基通常为__液体培养基__。
(1)基本成分:水、无机盐、__氨基酸__、维生素、糖类、__生长因子__等。
(2)按培养基来源分类:
名称
成分
不足
联系
天然培
养基
主要来自动物体液或动物组织分离提取液,如血清、__淋巴液__、鸡胚浸出液等。成分与细胞在体内需要的成分比较接近,含有丰富的营养物质及各种__生长因子__等,渗透压、pH也与体内环境相似
成分__复杂__,
来源__受限__
合成培
养基
根据细胞生存所需物质的__种类和含量__,用人工方法模拟合成的,便于对各种成分进行人工控制和标准化
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实际工作中往往将天然培养基与人工合成培养基结合使用,如在合成培养基中添加一定比例的__血清__或其他天然成分
小思考:幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较,分化程度低的细胞与分化程度高的细胞比较,哪些细胞更易于培养?为什么?
【答案】细胞的增殖能力与供体的年龄有关,幼龄动物的细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛,老龄动物的细胞则相反。所以,一般来说,幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞易于培养;分化程度越低的细胞,增殖能力越强,所以分化程度低的细胞更容易培养。
知识点二 动物细胞培养包括原代培养和传代培养
1.培养过程和细胞生长特点
培养
过程
细胞生
长特点
①贴附生长:贴附是有机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式,包括细胞与细胞间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触。体外培养时,绝大多数细胞仍然保持贴附生长的特性,必须贴附在某一固相支持物上生长。
②接触抑制:当细胞由于移动而相互靠近发生__接触__时,细胞不再移动,接触区域的细胞膜皱褶样活动停止,最终__细胞分裂停止__,这种现象称为接触抑制
2.原代培养和传代培养
(1)原代培养:细胞或组织离开有机体后的__首次培养__。
(2)传代培养
①需要传代培养的原因:随着时间的延长,体外培养的细胞数量不断增加。当增长到一定程度后,由于发生__接触抑制__或__培养空间__的限制及营养物质的消耗枯竭,生长会__逐渐减慢__,甚至停止并死亡。
②操作:将原培养瓶内的细胞分离并稀释后转到__多个培养瓶__中,在新的培养基中进行传代培养。
③要求:一般来说,原代培养的贴壁细胞达到生长基质的__80%__表面面积后可进行传代培养。若传代过晚,可影响下一代细胞的__动能状态__。贴壁生长的细胞需经__酶__消化制成细胞悬液后才能传代。
3.细胞系
(1)概念:原代培养物经__首次__传代成功后即成细胞系。
(2)连续细胞系(__无限细胞系__):能连续培养下去的细胞系。其被认为是发生转化了的细胞系(遗传物质发生改变),有的连续细胞系是__恶性细胞系__,有的连续细胞系虽已获得了不死性,但保留接触抑制现象,不致癌,是__良性无限细胞系__。
(3)有限细胞系:不能连续培养下去的细胞系。二倍体细胞通常为__有限细胞系__,如人的成纤维细胞可传__30~50__代,相当于150~300个细胞周期。
4.细胞株
(1)概念:通过一定