内容正文:
专题11基因工程、细胞工程和胚胎工程
基因工程
一、DNA重组技术的基本工具
1. ——“分子手术刀”
(1)来源:主要是从 中分离纯化出来的。
(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中
部位的两个核苷酸之间的 断开,因此具有 。
(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式: 和 。
2. ——“分子缝合针”
(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:
①相同点:都缝合 键。
②区别:E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。
(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将 加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接 的末端,形成磷酸二酯键。
3.基因进入受体细胞的 ——“分子运输车”
(1)载体具备的条件:① ②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。③
(2)最常用的载体是 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有 能力的 。
(3)其它载体:
二、基因工程的基本操作程序
第一步:
1.目的基因是指:
2.获取目的基因的方法 、 、
3.原核基因采取 获得,真核基因是 。人工合成目的基因的常用方法有 和 。
4.PCR技术扩增目的基因
(1)原理:
(2)过程:第一步:加热至90~95℃ ;第二步:冷却到55~60℃,
;第三步:加热至70~75℃, 。
第二步:
1.目的:使目的基因在受体细胞中 ,并且可以 ,使目的基因能够 作用。
2.组成:目的基因+ +终止子+ +
(1)启动子:是一段有特殊结构的 ,位于基因的 ,是 识别和结合的部位,能驱动基因 ,最终获得所需的 。
(2)终止子:也是一段有特殊结构的 ,位于基因的 。
(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中 ,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是 。
第三步:将目的基因导入
1.转化的概念:是 进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持 的过程。
2.常用的转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 ,其次还有 和 等。
将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 。此方法的受体细胞多是 。
将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是