备课素材：重组DNA分子的筛选与鉴定2021-2022学年高二下学期生物人教版选择性必修3

重组DNA分子的筛选与鉴定         重组DNA导入受体细胞以后，必须使用各种筛选与鉴定手段区分转化子（接纳载体或重组分子的转化细胞）与非转化子（未接纳载体或重组分子的非转化细胞）、重组子（含有重组DNA分子的转化子）与非重组子（仅含有空载载体分子的转化子），以及期望重组子（含有目的基因的重组子）与非含期望重组子（不含目的基因的重组子）。       重组DNA分子的阳性克隆被称为重组子。重组子的筛选方法有平板筛选法、电泳筛选法、PCR、核酸杂交等。 （一）平板筛选法 1、双抗生素抗性基因的双筛选 例1.(2016·全国卷Ⅰ)某一质粒载体如图所示,外源DNA插入Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后,与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题: (1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有　　　　(答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。 (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是二者均不含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均不生长;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒(或含有重组质粒)的细胞也是不能区分的,其原因是二者均含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落,还需使用含有四环素的固体培养基。 (3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自　　　　　。 实验方法——影印平板培养法 2、AmpR表示氨苄青霉素抗性基因和LacZ基因的双重筛选 蓝白斑筛选（选择性必修3第98页）      大肠杆菌本身是能够表达β-半乳糖苷酶的（有乳糖存在下）。正常的大肠杆菌在含有X-gal的培养基上都是蓝色，根本不需要蓝白斑技术来筛选。能够用来进行蓝白斑筛选的菌株我们把它叫做β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。也就是这个菌株不能表达出完