3.1 重组DNA技术的基本工具（第二课时）-【名校同步】2021-2022学年高二生物精品课件（人教版2019选择性必修3）

第3章第1节（第二课时） 实验：DNA的粗提取与鉴定 Copyright © 2022 liqionghua 版权申明：本课件为著作人原创作品，未经著作人授权不得擅自抄袭转载摘编或用于商业用途 小沫高中生物课堂 1.提取DNA的方法 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 （1）提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 （2）提取DNA的基本思路（DNA的粗提取） 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 2.实验原理 （1）DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精 （2）在2mol/L的NaCl溶液中溶解度最高 （3）DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色 0 DNA溶解度 NaCl浓度 0.14mol/L 2mol/L 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 3.实验材料 新鲜洋葱或香蕉、菠菜、菜花、猪肝等；95%的酒精、2mol/L的NaCl溶液、研磨液、二苯胺试剂和蒸馏水等。 使构成染色体的核蛋白加速解聚，游离出DNA分子，并使DNA分子充分溶解于NaCl溶液中。 洗 涤剂 SDS:使蛋白质变性与DNA分离; EDTA:是一种DNA酶的抑制剂，可防止细胞破碎后DNA酶降解DNA; Tris:提供缓冲体系，DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 4.实验步骤 (1)称取约30g洋葱,切碎,然后放入研中,倒入10mL研磨液,充分研磨。 (2)在漏斗中垫上纱布,将洋葱研磨液过滤到烧杯中,在4℃冰箱中放置几分钟后,再取上清液。也可以直接将研磨液倒入塑料离心管中,在1500r/min的转速下离心5min,再取上清液放入烧杯中。 研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而影响提取的DNA含量 过滤能用滤纸代替吗？ 不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。 可能含有DNA、RNA以及蛋白质、脂质、糖类等。 4.实验步骤 (3)在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%),静置2~3 min,溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去上面的水分;或者将溶液倒入塑料离心管中,在10000r/min的转速下离心5min,弃上清液,将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。 （1）冷却的酒精溶液(体积分数95％)作用： 一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解； 二是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。 避免破坏DNA 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 这一步的目的是蛋白质溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 (4)取两支20mL的试管,各加入2mol/L的NaC1溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaC1溶液中。然后,向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热5 min。待试管冷却后,比较两支试管中溶液颜色的变化。 4.实验步骤 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 【请同学们补充完整以下实验步骤】 试管编号 A（对照组） B（实验组） 步骤1 2mol/L的NaC1溶液5mL 步骤2 不进行任何处理 步骤3 步骤4 沸水浴加热5min 实验现象 溶液不变蓝色 实验结论 加丝状物或沉淀物 加4mL的二苯胺试剂 溶液逐渐变蓝 DNA在沸水浴的情况下遇二苯胺试剂会被染成蓝色 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 5.结果分析与评价 1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？ 观察提取的DNA的颜色，如果不是白色状物，说明DNA中的杂质较多。 二苯胺试剂鉴定呈现蓝色，说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。 【实验：DNA的粗提取与鉴定】 2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？ 本实验出提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。 3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同分析产生差异的原因。 从多种方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺试剂显色的深浅等，看看哪种实验材料，哪种提取方法的效果更好。 5.结果分析与评价 【进一步探究】 本试验只是对DNA进行了粗提取，请查阅资料，了解实验室提取纯度较高的DNA的一种方法，并与本实验中所使用的方法进行比较，总结两种方法的异同。 实验室提取纯度较高的DNA的方法有不少。例如，可以先添加质量分数为25%的SDS溶液，使蛋白质变性后与DNA分开；随后，加入氯仿—异丙醇混合液（体积比为24:1），通过离心将蛋白质及其它杂质除去，取