1.2.2 微生物的选择培养与计数学案2021-2022学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第2节　微生物的培养技术及应用 第2课时　微生物的选择培养与计数 学习目标： 1.学会用生物与环境相适应的观点理解选择培养的原理 2.学会通过调整增养基的配方来有目的地培养某一种微生物 3.学会用多种方法测定微生物的数量 学习内容： 一、选择培养基 1.自然界中目的菌的筛选：从目的菌株生存的 中找。 (1)实例：聚合酶链式反应(PCR)中用到的耐高温的DNA聚合酶，是从热泉中筛选出来的 中提取出来的。 (2)依据：水生栖热菌能在 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 2.选择培养基：允许 的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基。 3.实验室中目的菌的筛选 (1)原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时 其他微生物的生长。 (2)方法：利用 培养基分离。 二、微生物的选择培养 1.方法：对样品进行充分 ，然后将 涂布到制备好的 培养基上。也就是采用稀释涂布平板法。 2.稀释涂布平板法的操作过程 (1)系列稀释操作 ①将10 g土样加入盛有 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。 ②取1 mL上清液加入盛有 mL无菌水的试管中，依次等比 。 (2)涂布平板操作 ①取菌液：取0.1 mL菌液，滴加到 表面。 ②涂布器消毒：将涂布器浸在盛有 的烧杯中。 ③涂布器灭菌：将涂布器放在火焰上 ，待酒精燃尽、涂布器 后，再进行涂布。 ④涂布平板：用涂布器将 均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布 。 (3)培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板 ，放入30~37℃ 中培养1～2 d。 三、微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法 (1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少 。 (2)计数原则： ①一般选择菌落数为 的平板进行计数。样品的 将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。 ②在一同稀释度下，应至少对 个平板进行重复计数，然后求出 。 (3)结果分析：统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是 。因此，统计结果一般用 而不是用活菌数来表示。 2.稀释涂布平板法操作注意问题 (1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需 ；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处。 (2)涂布操作中的注意事项 ①涂布器浸在体积分数为 %的酒精中，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上 。 ②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免 。 (3)同一稀释度的样液加到 个或 的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。 (4)计算公式 每克样品中的菌株数＝ 。 3.显微镜直接计数法：是一种常用的、快速 的测定微生物数量的方法。 (1)原理：利用特定的细菌计数板或 ，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，。 (2)结果：统计的结果一般是 的总和。 四、微生物两种两种接种方法的比较 主要方法 平板划线法 稀释涂布平板法 主要步骤 在 体培养基 表面 划线 系列 操作和 操作 接种工具 能否用 于计数