大题13 基因工程备战-备战2022年高考生物之【考前抓大题】（山东专用）

专题5.1 基因工程 1．（2021届山东省聊城市高三一模生物试题） 人体内的t—PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药，但是心梗患者注射大剂量的t—PA会诱发颅内出血。研究证实，将t—PA蛋白第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t—PA蛋白。（注:下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）请回答下列问题： （1）以上制造出性能优异的改良t—PA蛋白的过程被称为________工程。已知t-PA基因序列已测出，且第84位的半胱氨酸对应的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸对应的模板链碱基序列为AGA，因此要获得改造后的目的基因最好釆用________法获得。若t—PA基因可从cDNA文库中获取，cDNA文库中的基因________（填“含有”或“不含”）内含子序列。 （2）若用PCR技术扩增改良后的t—PA基因，需要在PCR扩增仪中加入_______种引物，其作用是________。在t—PA改良基因与质粒pCLYll构建基因表达载体时，需要用限制酶________切割。 （3）以大肠杆菌作为受体细胞，在含新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，原因是________，这时需选择呈________色的菌落，进一步培养检测和鉴定，以选育出能生产改良t—PA蛋白的工程菌株。 2．（2021届山东省教科所高三二轮复习模拟考试生物试题） 基因敲除又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。可用于基因功能的研究和单基因遗传病的治疗。为研究小鼠细胞中基因X的功能，科学家通过同源重组法将小鼠胚胎干细胞中的基因X的活性消除并获得嵌合体小鼠。在制备置换载体时，将neor基因（抗新霉素基因）作为置换基因X的插入突变，同时在neor基因外侧添加HSV—tk基因，该基因的表达产物能将DHPG转化为有毒物质而使细胞死亡，如图1所示。置换载体导入ES细胞后，可发生同源重组和非同源重组，如图2所示。获得嵌合体小鼠的过程如图3所示。 （1）根据图1可知，在构建基因X的置换载体时，需用相同的_____酶切割基因X和_____，该酶的切割位点应位于_____，用相同酶切的目的_____。 （2）ES细胞在功能上具有的特征是_____，常用_____技术将置换载体导入ES细胞，将置换载体导入ES细胞后，如何将发生同源重组的ES细胞筛选出来？并简述理由。方法：_____理由：_____。 （3）将嵌合体胚胎移植到受体小鼠之前，受体小鼠需做_____处理，目的是_____。 3.（2021届山东省济南市章丘区高三4月二轮阶段性测试） 将PV病毒外壳蛋白基因（PVY—CP）导入马铃薯，并使之表达即可获得抗PVY病毒马铃薯。图示是获得抗病毒马铃薯的部分操作，PVY—CP可以从质粒A中获取；质粒B是选用的运载体，另已知部分限制酶识别序列和切割位点： BamH I HindⅢ BglⅡ SmaⅠ G↓ GATCC CCTAG↑G A↓ AGCTT TTCGA↑A A↓ GATCT TCTAG↑A CCC↓GGG GGG↑CCC 请结合图像，运用所学知识回答问题： （1）含有PVY—CP的质粒A保存在某细菌群体中，各个细菌含有相关不同的基因，这样的细菌群体称为_____________________________。 （2）PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为__________________________。 （3）关于步骤②中 Klenow酶的猜测，合理的有____________。 A．降低化学反应的活化能 B．可以将DNA片段的粘性末端变成平末端 C．能催化DNA链的合成 D．与DNA连接酶的功能相同 （4）步骤④中应该使用的限制酶是_________________________。 （5）利用农杆菌转化法进行转化，首先需要将质粒C导入____________中，进而转化马铃薯，一般情况下，不能直接用未处理的农杆菌菌作为受体细胞，原因是__________________________________。 4.（2021届山东省临沂市高三二模生物试题） 生物柴油作为新型能源已经成为世界上应用最广泛、发展迅猛的可再生能源之一。研究人员利用基因工程的方法，将油料作物紫苏的产油基因DGAT1与含有氨苄青霉素抗性基因的pMD克隆质粒构建pMD—DGAT1重组质粒，然后导入大肠杆