3.2.1 基因工程的基本操作程序-【备课优选】2021-2022学年高二生物同步课件讲解（人教版2019选择性必修3）

第2节 基因工程的基本操作程序 从基因文库中寻找 聚合酶链式反应（PCR）扩增 目的基因的核苷酸序列未知 目的基因的核苷酸序列已知 （一）目的基因的筛选与获取 2 PCR原料 PCR过程 5 PCR过程 引物：一小段可以和目的基因互补配对的脱氧核苷酸链 模板DNA:含有目的基因的一段DNA片段 原料:四种脱氧核苷酸（dCTP、dATP、dGTP、dTTP） Taq酶：具有热稳定性的DNA聚合酶 过程：分变性、复性、延伸三步骤 PCR引物设计原则 ⑤ PCR引物设计原则 使用的两种引物的序列不相同 两种引物都结合在DNA模板链的_____端 引物长度要适宜 引物GC含量要适宜 引物自身不应存在互补序列 两条引物之间不应存在互补序列 引物5'端可以修饰，3'端不可修饰 退火温度要适宜 需在引物的5’端加上限制酶的酶切位点 3’ 针对训练-1 针对训练-1 PCR过程 一个DNA，一对引物（A与B），通过PCR扩增n次： ①子代DNA分子中等长链DNA分子数为：______个 ②子代DNA分子中不等长链DNA分子数为：_______个 ③子代DNA分子中含模板链DNA分子数为：_______个 ④子代DNA分子中含引物A（或B）的DNA分子数为：______个 ⑤复制过程中共需引物________个 ⑥第n次复制需要引物_________个 2n-2n 2n 2 2n-1 2n＋1 - 2 2n PCR扩增DNA规律 PCR产物检测 PCR技术与DNA复制的比较 DNA复制 PCR技术 场所 原理 条件 解旋方式 酶 特点 结果 碱基互补配对原则 碱基互补配对原则 四种脱氧核苷酸、模板、酶、ATP 四种脱氧核苷酸、模板、酶、引物 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化解旋 半保留复制、边解旋边复制 半保留复制、全解旋再复制 体外复制 主要在细胞核内 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶、解旋酶等 思考：用PCR可以扩增mRNA吗？ 课后练习 课本，P83，概念检测-2 课本，P83，拓展-2 （二）基因工程的核心:基因表达载体的构建 ①单酶切 单酶切缺点: 质粒重新环化 目的基因自身环化 质粒与目的基因反向连接(后果) a b a b ②双酶切的优点: 防止质粒重新环化 防止质粒与目的基