内容正文:
第03讲 动物细胞工程
【学习目标】
1. 动物的细胞培养与克隆动物。
2. 动物细胞融合与单克隆抗体的制备。
3. 干细胞。
4. 胚胎工程技术的过程及应用。
【基础知识】
一、动物细胞培养
1.概念:从动物体中_取出_相关的_组织_,将它__分散成单个细胞_,然后在__适宜的培养条件_下,让这些细胞_生长_和_增殖_的技术。
2.原理:__细胞增殖__
3.地位:__动物细胞工程的基础__
4.关键操作:_原代培养_和__传代培养_。
(一)动物细胞培养的条件
(二)动物细胞培养的过程
1.取动物组织
(1)取材:__动物胚胎__或__幼龄动物__的组织、器官。
(2)取材原因:_细胞分化程度低,增殖能力强,容易培养___。
2.制成细胞悬液
(1)制成细胞悬液的步骤:①__将组织分散成单个细胞__;②__用培养液将细胞制成细胞悬液__
(2)将组织分散成单个细胞的原因:①从动物体取出的成块组织中,细胞与细胞__靠在一起__,彼此__限制了生长和增殖_;②__能使细胞与培养液充分接触,更易进行物质交换_。
(3)将组织分散成单个细胞的方法:①__机械法__;②___用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间___。
3.原代培养
将_细胞悬液__放入__培养皿或培养瓶_内
4.分瓶、传代培养
悬浮生长类: __直接用离心法收集_;贴壁生长类:重新用胰蛋白酶等处理,使之分散成单个细胞,然后再用离心法收集;将收集的细胞制成 细胞悬液 ,分瓶培养。
5.植物组织培养与动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
理论基础
细胞增殖
区
别
培养基
类型
固体或半固体培养基
培养基
成分
水、矿质元素、维生素、植物激素、蔗糖、氨基酸、琼脂等
葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、 等
取材
离体植物器官、组织、细胞
动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织
关键环节
细胞的脱分化和再分化
细胞增殖和癌变
结果
新的组织或植株个体,可以体现全能性
新的细胞系或细胞株,不形成个体,不体现全能性
应用
①植株快速繁殖;②脱毒植株的培育;
③人工种子;④生产药物、杀虫剂等;
⑤转基因植物的培育
①蛋白质生物制品的生产;②皮肤移植材料的培育;③检测有毒物质;④生理、病理、药理等方面的研究
相同点
两种技术手段培养过程中细胞都进行 分裂,都是 繁殖,都可称克隆,都不涉及减数分裂;②均为无菌操作,需要适宜的温度、pH等条件
(三)干细胞培养及其应用
1.分布
干细胞存在于_早期胚胎__、_骨髓_和__脐带血__等多种组织和器官中。
2.分类
干细胞包括__胚胎干细胞_和_成体干细胞__等
(1)胚胎干细胞(简称ES细胞 )
①分布:存在于_早期胚胎_中
②特点:__具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能___。
(2)成体干细胞
①分布:存在于_成体组织或器官内__中
②类别:包括_骨髓__中的_造血干细胞__、_神经系统_中的__神经干细胞__、_睾丸_中的__精原干细胞_等。
③特点:_一般认为,成体干细胞具有组织特异性,只能分化成特定的细胞或组织,不具有发育成完整个体的能力___。
3.干细胞的应用
(1)原理:干细胞有着_自我更新__能力及_分化_潜能的干细胞,与__组织、器官_的_发育、再生和修复_等密切相关。
(2)应用:
造血干细胞:治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病 。
神经干细胞:治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病(如帕金森病、阿尔茨海默病等) 。
诱导多能干细胞(iPS细胞):可治疗小鼠的镰状细胞贫血症,在治疗阿尔兹海默病、心血管疾病等领域 。
二、动物细胞融合与单克隆抗体技术
(一)动物细胞融合技术
1.概念:使_两个_或_多个_动物细胞结合形成_一个_细胞的技术。
2.结果:形成的_杂交细胞__具有__原来两个或多个细胞的遗传信息_。
3.原理:_细胞膜具有一定的流动性__。
4.意义:__突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能__。
5.诱导融合的常用方法:__电融合法__、_聚乙二醇PEG融合法__和__灭活病毒诱导法__。
6.融合实质及完成的标志:_细胞核的融合___。
7.应用:
①细胞融合技术已经成为研究__培育生物新品种_、_细胞遗传__、_细胞免疫_和__肿瘤_等的重要手段。
②利用动物细胞融合技术发展起来的__杂交瘤技术__,为__制造单克隆抗体_开辟了新途径。
8.动物细胞融合和植物体细胞杂交比较
项目
植物体细胞杂交