内容正文:
第一章 发酵工程
第2节 微生物的培养技术及应用
一、微生物的基本培养技术
1.研究和应用微生物的前提(即发酵工程的重要基础):防止杂菌污染,获得纯净的微生物培养物。(P9)
2.在实验室培养微生物的要求:
(1)为微生物提供合适的营养和环境条件(培养基)。
(2)要确保其他微生物无法混入,并将需要的微生物分离出来(无菌技术)。(P9)
(一)培养基的配制
1.培养基概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。(P9)
2.培养基作用:用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。(P9)
3.培养基的分类(按照物理性质分类)(P9)
(1)液体培养基:不含凝固剂(如琼脂),呈液体状态。
用途:扩大培养获得大量菌种、常用于工业生产。
(2)固体培养基:含凝固剂(如琼脂),呈固体状态。
用途:分离、计数、鉴定等。
拓展了解:培养基的分类(按照化学成分分类)
(1)天然培养基:含化学成分不明确的天然物质。用途:工业生产。
(2)合成培养基:培养基成分明确。用途:分类、鉴定。
培养基的分类(按照用途分类)
(1)选择培养基:允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长。用途:培养、分离出特定微生物。
(2)鉴别培养基:在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。用途:鉴别不同种类微生物。
4.怎样将液体培养基制成固体培养基?加入适量琼脂。(P9)
5.实验室中最常用的培养基之一:琼脂固体培养基。(P9)
6.微生物在琼脂固体培养基的表面或内部生长,可以形成菌落。(P9)
7.培养基的基本成分:各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质,此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。(P10)
8.碳源:(1)概念:提供碳元素的物质。
(2)分类: 无机碳源,如CO2、CO32-、HCO3-等。
有机氮源,如葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。
(3)适用范围(一般情况下)
添加无机碳源培养基用来培养自养微生物;
添加有机碳源培养基用来培养异养微生物。
9.氮源:(1)概念:提供氮元素的物质。
(2)分类:无机氮源,如N2、NO3-、NH3、NH4+等。
有机氮源,如牛肉膏、蛋白胨、尿素等。
(3)适用范围(一般情况下)
不添加氮源培养基可用来培养固氮微生物。
10.为什么培养基需要氮源?
培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
11.含C、H、O、N的有机物可作为异养型微生物的碳源、氮源、能源。
12.自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于碳源。
13.能否根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型?
可以,例如自养型微生物所需的碳源来自无机碳源,异养型微生物所需的碳源来自有机碳源。
14.无机氮源能给自养型微生物提供能源吗?
可以,例如NH3既作为硝化细菌的氮源,也作为能源(NH3氧化释放的化学能)。
15.无机盐除了可以调节酸碱平衡、维持一定的渗透压之外,还能有什么功能?
有些无机盐离子可以作为化能合成菌的能源(如铁细菌)
有些无机盐离子可以激活某些酶(如Mg2+激活DNA聚合酶)
16.在提供主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
17.是否所有培养基中都必须添加碳源、氮源?
不是,例如分离固氮菌不需要额外添加氮源,其可以直接利用空气中的氮气。
(二)无菌技术
1.获得纯净的微生物培养物的关键:防止杂菌污染。(P10)
2.无菌技术应围绕如何避免杂菌的污染展开。(P10)
3.无菌技术主要包括消毒和灭菌。(P10)
4.无菌技术工作两个方面
(1)对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
(2)对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。(P10)
5.做好消毒灭菌工作后,要注意:实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。(P10)
6.为避免周围环境中微生物的污染,应如何操作?
在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。(P10)
7.无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么作用?无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。
8.消毒:(1)概念:是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。(P10)
(2)方法:a.日常生活中经常用到煮沸消毒法,操作方法:100 ℃煮沸5~6min;
b.对于一些不耐高温的液体如牛奶,可使用巴氏消毒法,操作方法:62~