内容正文:
第2节 微生物的培养技术及应用
二 微生物的选择培养和计数
情境导入
聚合酶链式反应(PCR)是一种在体外扩增DNA片段的技术,此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。1973年,科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌,进而提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于聚合酶链式反应(PCR)。
美国黄石公园的热泉
讨论:1.筛选水生栖热菌的思路是什么样的?
2.为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢?
耐高温的酶
寻找
耐高温的生物体
寻找
高温环境(热泉、火山口)
根据微生物对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
这是因为水生栖热菌能在70~80℃的高温条件下生存,而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
一、选择培养基
1.概念:
在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基
2.原理:
人为提供_________ ________的条件(包括_____、_____和_____等),同时___________________________。
有利于目的菌生长
抑制或阻止其他微生物的生长
营养
温度
pH
3.举例:
(1)利用改变培养条件进行选择培养。
70~80℃的高温
分离耐高温的水生栖热菌
使用将pH调至酸性的培养基
分离耐酸菌
(2)利用营养条件进行选择培养
不加碳源(含碳有机物)的培养基
分离出自养型微生物
不加氮源的培养基
分离出固氮菌
(3)利用添加某种化学物质进行选择培养
加入青霉素
分离酵母菌、霉菌等真菌
二、微生物的选择培养
1.方法:
稀释涂布平板法
2.操作流程
①铲取土样,将样品装入纸袋中
②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀,制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中,依次等比稀释。
1ⅹ107
1ⅹ105
1ⅹ106
1ⅹ103
1ⅹ102
1ⅹ104
9mL无菌水
1ⅹ10
90mL无菌水
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
③取0.1mL菌液,滴加到(选择)培养基表面。
④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
⑤将涂布器放在火焰上灼烧,待酒精燃尽、涂布器冷却后,再进行涂布
⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿,使涂布均匀。
注意事项:
①10g土样加入