1.2.2 微生物的选择培养和计数 课件-2021-2022学年人教版（2019）高中生物选择性必修三（共17张PPT）

第2节 微生物的培养技术及应用 二 微生物的选择培养和计数 河北峰峰第二中学 一、选择培养基 1.概念： 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基 2.原理： 人为提供_________________的条件（包括_____、_____和_____等），同时___________________________。 有利于目的菌生长 抑制或阻止其他微生物的生长 营养 温度 pH 3.举例： （1）利用改变培养条件进行选择培养。 70～80℃的高温 分离耐高温的水生栖热菌 使用将pH调至酸性的培养基 分离耐酸菌 （2）利用营养条件进行选择培养 不加碳源（含碳有机物）的培养基 分离出自养型微生物 不加氮源的培养基 分离出固氮菌 （3）利用添加某种化学物质进行选择培养 加入青霉素 分离酵母菌、霉菌等真菌 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 讨论：1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同 二、微生物的选择培养 1.方法： 稀释涂布平板法 2.操作流程 ①铲取土样，将样品装入纸袋中 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1ⅹ107 1ⅹ105 1ⅹ106 1ⅹ103 1ⅹ102 1ⅹ104 9mL无菌水 1ⅹ10 90mL无菌水 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL ③取0.1mL菌液，滴加到（选择）培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 注意事项： ①10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，在计算时，不要忽略； ②由于使用的是选择培养基，所以一般情况下，获得的单菌落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证； ③过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行； ④将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。 待涂布的菌液被__________后，将平板_____，放入___________中培养____d，在涂布有________菌液的平板上就可以观察到分离的_______； 培养基吸收 倒置 恒温培养箱 1-2 合适浓度 单菌落 稀释涂布平板法除可以分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目； 三、微生物的数量测定 ——间接计数法 1.稀释涂布平板法 （1）原理： 当样品的稀释度足够___时，培养基表面生长的一个____，来源于__________中的一个____；通过计数平板上的____数，就能推测出样品中大约含有多少_____； 高 菌落 样品稀释液 活菌 菌落 活菌 （2）计数原则 ①选择菌落数为_______的平板计数 30-300 ②同一稀释度下，应至少对___个平板进行重复计数，然后求出______； 3 平均值 样品的______将直接影响平板上的菌落数目； 稀释度 （3）结果分析： ①统计的菌落数往往比活菌的实际数目____； 原因：__________________________________________ ______________ ②统计结果一般用_______而不是用活菌数来表示； 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 菌落数 （4）计算公式： 每g样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) M代表稀释倍数 2.显微镜直接计数 ——直接计数法 （1）方法： 利用特定的___________或_____________在______下观察、计数，然后再计算_________的样品中微生物的数量； 细菌计数板 血细胞计数板 显微镜 一定体积 血细胞计数