内容正文:
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
课题3 分解纤维素的微生物的分离
本专题复习点:
菌株筛选(分离)的原理
微生物计数的方法比较
分离、计数微生物实验中的实验原则
尿素分解菌的筛选、鉴定
纤维素分解菌的筛选、鉴定
菌株筛选(分离)的原理
类型 自然界筛选 实验室筛选
原理
实例
根据目的菌株对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找
分离耐热微生物:
分离耐寒微生物:
分离分解石油的细菌:
高温环境:如温泉
低温环境:如冰川
油田
从黄石公园的热泉分离出Taq细菌
(Taq DNA聚合酶)
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长
——选择培养基
加入青霉素(抗生素):
加入高浓度的食盐:
缺乏氮源:
石油作为唯一碳源:
缺乏碳源:
以尿素作为唯一氮源:
以纤维素作为主要碳源:
将培养基放在高温环境中培养:
将培养基pH调至较低水平中培养:
分离出酵母菌和霉菌等真菌
分离出耐盐细菌(金黄色葡萄球菌)
分离出固氮微生物
分离出自养型微生物
分离出石油分解菌
分离出尿素分解菌
分离出纤维素分解菌
分离出耐高温的微生物
分离出耐酸的微生物
微生物计数方法
类型 显微镜直接计数
(血球计数板计数法) 间接计数
(稀释涂布平板法)
原理
公式
缺点
结果
注意
利用血球计数板(或血细胞计数板),在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量
当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约有多少活菌
每克(mL)样品中的菌株数=(C÷V)×M
C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数
V:涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)
M:稀释倍数
每克(mL)样品中的菌株数=
计数室菌株数X104X稀释倍数
当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落
不能区分死菌与活菌
比实际值偏大
比实际值偏小
加样前要振荡,加样方法,计数原则
一般选用菌落数在30~300的平板进行计数
实验基本原则
类型 平行重复原则 对照原则
目的
实例
排除偶然因素对实验结果的影响,增强实验的说服力和准确性
排除实验组中非测试因素(无关变量)对实验结