【知识方法篇，苏教版】2014届高考生物一轮复习精讲精练（回扣基础+核心突破+命题探究）第43讲 生物化学与分子生物学技术实践

第43讲　生物化学与分子生物学技术实践 [考纲要求]　1.蛋白质的提取和分离。2.PCR技术的基本操作和应用。3.从生物材料中提取某些特定的成分。 考点一　生物技术实践——蛋白质的分离与纯化 1．纯化原理 蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度、所带电荷的多少、吸附性质等方面存在差异。 2．纯化方法 (1)透析法 ①原理：蛋白质水溶液具有亲水胶体溶液性质，不能透过半透膜。 ②目的：去除小分子化合物杂质，如无机盐、单糖、双糖、氨基酸等。 ③常用的半透膜：肠衣、玻璃纸。 ④步骤：将待纯化的蛋白质溶液装入透析袋内，再把透析袋放入透析液中即可。 (2)离心法 ①原理：在离心力的作用下，分子大小、密度不同的分子沉降速度不同，从而被分离。 ②目的：使分子大小、密度不同的不同种类的蛋白质彼此分离。 (3)电泳 ①概念：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象。 ②原理：不同的物质所带电荷不同，颗粒的大小、形状不同，因此，在电场中的泳动速度不同。 ③影响泳动的因素：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少；此外还有电场强度、溶液的pH等因素。 ④泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。 ⑤支持物：滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等。 易错警示　(1)注意：透析时间为12 h。透析袋是用硝酸纤维素制成，小分子可自由进出，而大分子保留在袋内。 (2)关键步骤及其技术要求：点样是本实验的关键步骤。点样前，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，以免引起样品扩散；但不易太干，否则样品不易进入膜内，造成点样起始参差不齐，影响分离效果。 1．仔细观察下图，所带负电荷少的球蛋白是 (　　) A．α1­球蛋白 B．α2­球蛋白 C．β­球蛋白 D．γ­球蛋白 答案　D 解析　对于几种球蛋白来说直径相差不大，引起泳动速度的差异主要来自于所带电荷多少，由图可知球蛋白由右向左泳动，因右侧为负极，且γ­球蛋白距点样处最近，所以γ­球蛋白所带负电荷最少。 1．透析 (1)过程：取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)，透析12h。 (2)图示： 2．血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 (1)血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳流程 (2)结