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21. (2021届福建省龙岩市高三3月质检)番茄果实在成熟的过程中,多聚半乳糖醛酸酶(PG)合成显著增加,以降解果胶使细胞壁破损,从而使果实变红变软,但不利于保鲜。科学家利用基因工程得到转基因番茄,大大延长果实保质期。操作流程如下,回答下列问题:
(1)利用RT—PCR技术即逆转录—多聚酶链式反应制备PG基因,最好从番茄的_____细胞中提取mRNA,此技术所需要的酶主要有_____。
(2)据图可知,转基因番茄主要通过抑制PG基因的_____过程,使PG合成量减少,从而延长果实保质期。
(3)图中的农杆菌。能够在含_____的培养基中生存,而在含_____的培养基中不能生存的即为已转化的所需农杆菌。
(4)图中将反向连接PC基因导入番茄细胞的方法称为_____。要检测感染农杆菌后的番茄细胞染色体DNA上是否插入了反向连接PC基因,_____(填“能”或“不能”)用标记的PG基因的单链作为探针进行检测,理由是_____。
(5)在将转化的番茄细胞通过植物组织培养技术形成番茄幼苗过程中,培养基_____(填“要”或“不要”)添加有机营养物质,原因是_____。
【答案】 (1). 果肉 (2). 逆转录酶和Taq酶(或热稳定DNA聚合酶) (3). 翻译 (4). 卡那霉素 (5). 四环素 (6). 农杆菌转化法 (7). 不能 (8). 番茄细胞内原有的天然PG基因和插入的反向连接PG基因,均会与该探针形成杂交带 (9). 要 (10). 该培养过程中植物细胞不能进行光合作用(或光合作用很弱)
【解析】
【分析】
基因工程技术基本步骤:
(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
(2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
(3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因−−DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA−−分子杂