1.2.2 微生物的选择培养和计数 导学案【新教材】2020-2021学年高二生物（人教版（2019）选择性必修三）

第1章 发酵工程 第2节 微生物的培养技术及应用 二 微生物的选择培养和计数导学案 主备人：闵锐 课型：自主 审核：高二生物备课组集体 备课时间：2021.03.15 【生命观念】概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求，进行酵母菌的纯培养。 【科学思维】阐明微生物选择培养的原理。 【科学探究】进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。 【教学重点】1.微生物纯培养的基本操作要求，微生物选择培养的原理。2.酵母菌的纯培养。3.土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。 【教学难点】1.酵母菌的纯培养。2.土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。 _____________________（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用_______的DNA聚合酶。1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而提取出_____的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于_______________（PCR）。 【思考】1.筛选水生栖热菌的思路是什么样的？ 2.为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？ 这是因为水生栖热菌能在_______________条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 一、选择培养基 1.概念：在微生物学中，将允许__________的微生物生长，同时_____或_____其他种类微生物生长的培养基。 2.类型： （1）利用改变培养条件进行选择培养。 _______________→分离耐高温的水生栖热菌。 （2）利用添加某种化学物质进行选择培养。 加入_____→分离酵母菌、霉菌等真菌。 加_____________→金黄色葡萄球菌。 （3）利用营养缺陷进行选择培养。 不加碳源（含碳有机物）的培养基→分离出_______微生物。 ________的培养基→分离出固氮菌。 【思考·讨论·选择培养基配方的设计】 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 二、微生物的选择培养 如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需要对土样进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法——_______________法。 1.稀释涂布平板法 将菌液进行一系列__________，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到__________培养基的表面，进行培养。 基本操作：（1）__________；（2）__________。 2.实验操作流程 ①铲取土样，将样品装入纸袋中。②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。④将_____浸在盛有_____的烧杯中。⑤将_____放在火焰上灼烧，待_____燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可_______________，使涂布均匀。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板_____，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d，在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的__________。 注意事项： ①10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已__________，在计算时，不要忽略； ②由于使用的是_____培养基，所以一般情况下，获得的单菌落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证； ③过程中所有操作都应在_______________旁进行； ④将涂布器从_____中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。 三、微生物的数量测定 1.间接计数法——_______________法 （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的__________。通过统计平板上的_______，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 （2）计数原则 ①一般选择菌落数为__________的平板计数。②在同一稀释度下，应至少对_____个平板进行重复计数，然后求出平均值。③适当的__________、_____是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 （3）结果分析：①统计的菌落数往往比活菌的实际数目__________；②统计结果一般用__________而不是用活菌数来表示。 原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是__________。 （4）计算公式：每g样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的_______________；V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M代表__________。 【例1】某同