内容正文:
微生物的培养技术及应用
第二节
微生物的选择培养和计数(一)
科学实例:寻找耐高温的DNA聚合酶
聚合酶链式反应(PCR)是一种在体外扩增DNA片段的技术,此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。
1973年,布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌,并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。
筛选原因:水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存,而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
美国黄石公园的热泉
美国黄石公园的热泉
美国黄石公园的热泉
美国黄石公园的热泉
美国黄石公园
那么,如何从众多的微生物中筛选出单一菌种?
根据微生物对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找
筛选原则
耐寒微生物
耐热微生物
石油分解菌
自然界中微生物数量繁多,种类庞杂,要想从中分离出需要的特定微生物并不容易,尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时,更难实现。
稀释涂布平板法呈现的杂菌群
那么我们又如何达成这一目标呢?
科学家们应用选择性培养基解决了这一难题。
分离酵母菌、霉菌等真菌
分离固氮菌
分离自养型微生物
④加高浓度食盐
金黄色葡萄球菌
⑤金黄色葡萄球菌
能消除石油污染的微生物
一、选择培养基
③不加含碳有机物的无碳培养基
②不加氮源的无氮培养基
①加入青霉素的培养基
允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称为选择培养基。
选择培养基配方的设计
尿素含氮量高,化学性质稳定,是一种重要的农业氮肥,尿素施入土壤后,被某些细菌分解成NH3,NH3再转化成NO3-、NH4+等才能被植物吸收。
土壤中尿素分解菌之所以能将尿素分解,是因为它们能合成脲酶:
CO(NH2)2+H2O
脲酶
CO2+2NH3
怎样才能将分解尿素的细菌从土壤中分离出来?
思考-讨论
尿素的立体结构
培养基添加尿素作唯一氮源,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到10