专题01 “DNA的粗提取与鉴定实验”考点聚焦-2020-2021学年高二生物下学期知识点梳理与测试（人教版选修3）

“DNA的粗提取与鉴定实验”考点聚焦 周伟（湖南省耒阳市第一中学 421800） 一、考点知识解读 1.实验原理 （1）粗提取原理：在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低；在0.14mol/L时，DNA的溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA溶解度又增大。 （2）纯化原理：DNA不溶于酒精，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。 （3）鉴定DNA原理：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。 2. 实验材料的选择及处理 （1）不选择猪血等哺乳动物的血液，因为哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。 （2）需要在鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠溶液，防止血液凝固。 （3）需除去鸡血中的血浆，因为血浆中无DNA。 特别提醒：不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。 3. 实验过程 步骤：提取细胞核物质→溶解核内DNA→析出DNA粘稠物→滤取含DNA的粘稠物→DN A粘稠物的再溶解→过滤含有DNA的氯化钠溶液→提取含杂质较少的DNA→DNA的鉴定。 操作要点：（1）2次加蒸馏水：第一次是在是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是为了稀释氯化钠溶液。 （2）3次加氯化钠溶液：第一次加氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离并溶解在氯化钠溶液中；第二次加氯化钠溶液也是为了DNA的再溶解，这时溶液中的蛋白质含量已很少；第三次加氯化钠溶液还是为溶解DNA。 （3）6次搅拌：除最后一次搅拌外前5次搅拌均朝一个方向:，并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓玻璃棒，不要直插烧杯底部防止DNA分子断裂。 （4）3次过滤：第一次过滤，留滤液；第二次过滤，留粘稠物；第三次过滤，留滤液。注意这3次过滤都用纱布，获得沉淀物或粘稠物的通常为多层，获得滤液的纱布层数适当减少。 特别提醒：若以植物为实验材料，步骤上大致相同，在材料的处理上有几点不同：一是增加研磨步骤，目的是破坏细胞壁；二是加入洗涤剂，目的是溶解细胞膜及核膜；三是加食盐，可加速细胞膜及核膜的破裂。 4. 实验注意事项 （1）用冷酒精浓缩和沉淀DNA时所用的95%酒精