内容正文:
单克隆抗体制备技术
monoclonal antiboddy production
本章内容
单克隆抗体概念、特性、与多克隆抗体的异同点?
杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤细胞的克隆方法
单克隆抗体的制备流程和应用
概念
多克隆抗体(PcAb):针对抗原不同表位的多个B淋巴细胞克隆产生的混合抗体
单克隆抗体(McAb):只针对抗原单一表位的B淋巴细胞克隆产生的同源抗体
为何要使用单克隆抗体?
一个抗原分子可能含有许多抗原表位
一个B细胞只会生产一种抗体
传统抗血清对相似抗原会有交叉反应性
一个抗原分子上常有许多表位
抗原分子上可以诱导出抗体的部位或片段,称为eptope 、antigenic determinant;一个抗原分子上通常都有许多eptope ,每个eptope至少都可诱生出一种抗体;因此在传统抗血清中,都含有许多种不同的抗体,分别针对这些不同的eptope。
一个B细胞只会生产一种抗体
血清中的每一种抗体是由单一种 B 细胞 所分泌产生,若能把此 B 细胞由脾脏中挑出来,单独培养成细胞株,则可获得单一种类的抗体,只会对一种 eptope反应。 大量培养此细胞株,即可有品质一定、纯度均一的抗体,即单克隆抗体。
抗血清对相似抗原会有交叉反应性
对于分子构造相似的抗原,由于它们含有共同或相似的eptope ,所产生的抗血清对这两种相似的抗原都会产生反应,称为交叉反应性。 同时又由于免疫动物的个体差异,对抗原的反应也有相当的差异,以致无法准确控制所得到每批抗血清 效价的高低
抗血清和单克隆抗体制备
B细胞无法在培养基中生长
B细胞不易在培养基中生長,虽然有人一直努力,想找出在体外培养脾脏细胞的条件,但结果均不甚理想。 (見 图 中央的 4 号B 细胞,X 表示无法培养)
肿瘤细胞可在培养基中永久生长
肿瘤细胞可在培养基中永久生长:若把瘤细胞永久生长的特性,利用细胞融合技术导入可生产抗体的 B 细胞 中,则得到可在培养基中永久生长的 B 细胞株,即杂交瘤细胞株。
1975年Koehler和Milstein在Nature杂志联名发表题为“分泌预定特异性抗体的融合细胞持续培养“的论文,宣告单克隆抗体的诞生,该成果获1984年诺贝尔医学奖和生理奖.
杂交瘤技术制备单克隆抗体
杂交瘤技术的基