内容正文:
酵母细胞的固定化
【学习目标】
1、认识在应用酶的过程中,存在的实际问题及解决办法。
2、理解高果糖浆及生产高果糖浆的固定化酶技术。
3、掌握固定化技术的方法及适合不同固定方法的材料。
4、掌握固定化酵母细胞的实验操作过程,达到能够进行实际操作。
酵母细胞的固定化
一、固定化酶和固定化细胞技术
1、固定化酶的应用实例——生产高果糖浆
高果糖浆:果糖含量为42%左右,有益健康
(1)反应原理:葡萄糖 ――――――→果糖。
葡萄糖异构酶
酵母细胞的固定化
(2)生产原理
将酶固定在一种颗粒状的载体(图中②)上,再将这些酶颗粒装到一个反应柱(图中①)内,柱子底端装上分布着许多小孔的筛板(图中③)酶颗粒无法通过筛板的小孔,而反应溶液却可以自由出入。
(3)高果糖浆的生产生产操作:
①将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入。
②使葡萄糖溶液流过反应柱,与固定化葡萄糖异构酶接触。
③转化成的果糖,从反应柱的下端流出。
(4)固定化酶技术的优点:与一般酶制剂相比,固定化酶既能与反应物接触,又能与产物分离,同时还可以被反复利用。固定化细胞制备的成本更低,操作更容易。
2、固定化酶和固定化细胞技术
(1)概念:利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。
(2)常用方法
①包埋法,能将酶或者细胞包埋在不溶于水的多孔性载体中。
②化学结合法,能将酶或者细胞相互连接或者结合到载体上。
③物理吸附法,能将酶或者细胞吸附到载体表面。
(3)固定化酶和固定化细胞的比较
细胞个大,而酶分子很小;个大的细胞难以被吸附或结合,而个小的酶容易从包埋材料中漏出,所以酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化,而细胞多采用包埋法固定化。固定化酶,固定一种酶。固定化细胞可以固定一系列酶。
(4)包埋法载体:包埋法固定化细胞常用的是不溶于水的多孔性载体,如明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。
二、制备固定化酵母细胞并发酵
酵母细胞的活化
①选用纯种且具有较强的活性的干酵母。
②在缺水状态下,微生物处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。
③酵母细胞活化时体积会变大,因此活化前应该选择体积足够大的容器,以避免酵母细胞的活化液溢出。
④时间:1 h左右
配制CaCl2溶液
溶解CaCl2时勿用自来水,以免杂质离子影响实验结果。
配制海