内容正文:
专题 1 基因工程
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过___基因拼接_和_DNA重组_等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在_DNA分子_水平上进行设计和施工的,因此又叫做_转基因技术_。科技探索之路 基础理论和技术的发展催生了基因工程。
20 世纪中叶,基础理论取得了重大突破
●DNA 是遗传物质的证明
1944 年,艾弗里等人通过不同类型肺炎双球菌的转化实验,不仅证明了生物的遗传物质是DNA,还证明了___DNA是主要遗传物质_。
●DNA 双螺旋结构和中心法则的确立
1953 年,沃森和克里克建立了___DNA双螺旋结构___模型。
1958 年,梅塞尔松和斯塔尔用实验证明_DNA复制的方式-----半保留复制原则。随后不久确立的中心法则,解开了 DNA 复制、转录和翻译过程之谜,阐明了遗传信息流动的方向。
●遗传密码的破译
1963 年,尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的遗传密码。
1966 年,霍拉纳用实验证实了尼伦伯格提出的遗传密码的存在。这些成果不仅使人们认识到,自然界中从微生物到人类共用一套遗传密码_,而且为基因的分离和合成等提供了理论依据。技术发明使基因工程的实施成为可能。
●基因转移载体的发现
1967 年,罗思和赫林斯基发现细菌拟核 DNA 之外的质粒有_自我复制_能力,并可以在_细菌细胞间转移,这一发现为基因转移找到了一种运载工具。
●工具酶的发现
1970 年,阿尔伯、内森斯,史密斯在细菌中发现了第一个限制性内切酶(简称限制酶)后,20 世纪 70 年代初相继发现了多种限制酶和连接酶,以及逆转录酶,这些发现为 DNA 的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
●DNA 合成和测序技术的发明
自 1965 年,桑格发明氨基酸序列分析技术后,1977 年,科学家又发明了 DNA 序列分析的方法,为基因序列图的绘制提供了可能,之后,DNA 合成仪的问世又为引物、探针和小分子DNA基因的获得提供了方便。
●DNA 体外重组的实现
1972 年伯格首先在体外进行了 DNA 改造的研究,成功地构建了第一个体外重组 DNA 分子。重组 A DNA 表达 实 验的成功
1973 年,博耶和科恩选用仅含单一 EcoRI 酶切位点的载体质粒 pSC101,使之与非洲爪蟾核糖体蛋白基因的 DNA 片段重组。重组的 DNA 转入大肠杆菌 DNA 中,转录出相应的 mRNA。这个实验证明了①_质粒不仅可以作为基因工程的载体,②重组DNA还可以进入受体细胞,③外源基因可以在原核细胞中成功表达,并实现了物种之间的的基因交流,至此表明基因工程正式诞生。
第一例转基因动物问世
1980 年,科学家首次通过_显微注射法_培育出世界上第一个转基因小鼠。1983 年,科学家又采用农杆菌转化法_法,培育出世界上第一例转基因烟草。 此后,基因工程进入了迅速发展阶段。
R PCR 故术的发明
基因工程问世后,1988 年由穆里斯发明的 PCR 技术,使基因工程技术得到了进一步发展和完善。
1.1 A DNA 重组技术的基本工具
我国拥有自主知识产权的转基因抗虫棉的培育,首先要在体外对含有抗虫基因_基因的 DNA 分子进行“切割”、改造、修饰和“拼接”,然后,导入_棉花体___细胞内,并使重组 DNA 在细胞中_表达___。
限制性核酸内切酶 —— “ 分子手术刀 ”
切割DNA的工具是限制性核酸内切酶(restrictionen donucleases),又称限制酶(restriction enzyme)。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今已从近300种不同的微生物中分离出了约4000种限制酶。它们能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开(图1-2)。大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成,例如,EcoRI、SmaI限制酶识别的序列均为6个核苷酸,也有少数限制酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成。DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式—黏性末端和平末端(图1-3)。当限制酶在它识别序列的中心轴线(图中虚线)两侧将DNA的两条链分别切开时,产生的是黏性末端,而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时,产生的则是平末端。
寻根问底:根据你所掌握的知识,你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗?
提示:原核生物容易受到自然界外源 DNA 的入侵。限制酶就是细菌的一种防御性工具,限制酶在原核生物中主要起到__切割外源DNA__、使之失效,从而达到保护自身的目的。
生物技术资料卡:限制酶的命名用生物_属 名的头一个字母与_种 名的头两个字母,组成了 3 个字母的略语,以此来表示这个酶是从哪个