2020浙科版选修1高中生物实验1-大肠杆菌的培养和分离(共24张PPT)

L/O/G/O 微生物学基本技术 大肠杆菌的培养和分离 1 大肠杆菌的培养和分离 菌种保存 培养基的配制 灭菌 超净工作台 倒平板 接种液体 培养 分离培养 大肠杆菌基础知识： 由于细菌细胞壁结构不同，细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。 细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素。对青霉素更为敏感。 细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素 大肠杆菌是革兰氏阴性菌，异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道对人无害，但进入人的泌尿系统便会产生危害。大肠杆菌在基因工程中广泛应用，它的质粒是最常用的载体，也是基因工程中常用的受体细胞。 革兰氏阳性菌： 革兰氏阴性菌： 培养基 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 大肠杆菌培养基：一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后可在LB固体培养基上划线分离。 氮源 矿质元素 生长因子 能源 碳源 水 培养基种类 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 物理状态 01 选择培养基 鉴别培养基 目的用途 化学成分 02 合成培养基 天然培养基 03 培养基的制备 培养基配置流程 称量 溶化 调节ph 倒平板 灭菌 称量 溶化 调节ph 倒平板 灭菌 准确称取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。 加热熔化，用蒸馏水定容到50ml。配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂 用 1mol/L NaOH溶液调节ph至偏碱性 在两个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。 称量 溶化 调节ph 灭菌 称量 溶化 调节ph 倒平板 灭菌 倒平板 灭菌后，待固体培养基冷却至60 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。 ①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰； ③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶扣的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖； ④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置 防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基